Aplikasyon Ultrafiltrasyon nan Pwodiksyon Vaksen Laraj Imèn
Yo nan lòd yo ankouraje aplikasyon an nan ultrafiltrasyon nan pwodiksyon an nan vaksen laraj imen, yo te itilize kasèt manbràn ultrafiltrasyon 300kDa pou konsantre solisyon rekòt viris laraj la epi detekte rekiperasyon antijèn, pousantaj retire endotoksin ak pousantaj retire pwoteyin lame apre ultrafiltrasyon. Rezilta yo te montre ke anba presyon ki apwopriye a, solisyon rekòt viris laraj la te konsantre 80 fwa, elite 25 fwa, pousantaj rekiperasyon antijèn te 86.2%, pousantaj retire endotoksin bakteri an te 87.5% ~ 88.7%, ak to a retire pwoteyin lame te 91.6%.
Avanti
Laraj se yon maladi zoonotik tradisyonèl ki te koze pa viris laraj (RV), ak yon pousantaj lanmò ki rive jiska 100%. Kounye a, pa gen okenn tretman efikas pou apre ekspoze (sa vle di domaj nan po a ak manbràn mikez) ki pa vaksen ijans ak vaksen imunoglobulin. Sous prensipal laraj nan imen se mòde bèt malad oswa ki kapab enfekte (sitou chen). Pousantaj mòtalite laraj nan Lachin klase dezyèm nan mond lan, ak laraj se youn nan pwoblèm ki menase sekirite sante piblik nan peyi nou an. Glycoprotein kapsulè viris laraj la, ki se sèl antijèn kle ki pwovoke pwodiksyon antikò netralize pwoteksyon, te konsantre nan rechèch ak devlopman nouvo vaksen ak nouvo teknoloji dyagnostik ak tretman viris laraj.
Viris laraj la fè pati viris laraj genus nan fanmi rabdoviris la. Fòm nan nukleokapsid la elastik, nukleokapsid la se helically simetrik, ak sifas la gen yon anvlòp ki gen yon sèl-blon RNA. Se patojèn ki lakòz laraj. Viris laraj gen de antijèn prensipal: youn se antijèn glikoprotein sou manbràn ekstèn viris la, ki ka mare nan reseptè asetilkolin pou fè viris la neurotoksik, epi pwodui antikò netralize ak emoaglutinasyon antikò nan kò a, ak antikò netralize yo gen. yon efè pwoteksyon; Lòt la se antijèn riboprotein anndan an, ki ka fè kò a pwodui antikò obligatwa konpleman ak precipitin, epi li pa gen okenn efè pwoteksyon.
Endotoxin se yon kalite sibstans lipopolysaccharide (LPS), ki gen rezistans chalè ak estabilite chimik epi li pa fasil pou detwi. Si gen yon sèten konsantrasyon endotoxin nan vaksen an, li pral lakòz gwo lafyèv e menm lanmò apre vaksen an, kidonk kontni endotoxin nan vaksen an ta dwe redwi otank posib. Edisyon 2005 nan Farmakope Chinwa a (Pati III) te detèmine ke valè kontwòl endèks kalifye endotoksin vaksen kont laraj pa ta dwe pi wo pase 100EU / dòz. Avèk devlopman rapid nan teknoloji separasyon manbràn, aplikasyon an nan teknoloji separasyon manbràn ultrafiltrasyon diminye kontni an nan endotoxin nan vaksen ap vin pi plis ak plis gaye nan endistri pharmaceutique.
Yon vaksen kont laraj se yon vaksen kont laraj. Anjeneral gen twa kalite vaksen kont laraj, ki gen ladan vaksen selil Vero pirifye, vaksen selil diploid imen, ak vaksen prensipal kilti selil. Vaksen kont laraj fèt nan inokulasyon viris fiks viris laraj nan matris selilè, apre kilti, rekòt, konsantrasyon, inaktivasyon, pirifikasyon, epi ajoute estabilizasyon apwopriye. Fonksyon prensipal vaksen kont laraj se ankouraje kò a pou pwodui yon repons iminitè rapid epi pwodui antikò pwoteksyon kont viris laraj, pou anpeche enfeksyon ki te koze pa viris la epi redwi risk maladi.
Pwosesis pwodiksyon vaksen an jwe yon wòl enpòtan nan asire bon jan kalite vaksen an, espesyalman quantification kèk endikatè nan pwosesis pwodiksyon an pi enpòtan. Nan pwosesis pwodiksyon vaksen kont laraj imen, teknoloji konsantrasyon ultrafiltrasyon se yon mwayen nesesè pou pwodui vaksen kont laraj imen. Sèvi ak manbràn ultrafiltrasyon ouvèti rezonab pou konsantrasyon ultrafiltrasyon ka efektivman retire endotoxin ak pwoteyin lame, epi kenbe antijèn RV, ki se fezab nan pwodiksyon vaksen ak amelyorasyon kalite. Mas molekilè relatif nan molekil RV se 350kDa ~ 460kDa, ak nan teyori, RV ka konplètman bloke pa konsantrasyon ultrafiltrasyon lè l sèvi avèk kasèt manbràn ak pwa molekilè entèrsèpsyon nan 100kDa ak 300kDa. Endotoxin souvan fòme estrikti total nan diferan solisyon akeuz, paske nan degre nan agrégation, gwosè a molekilè diferan. Mas molekilè relatif nan monomè endotoxin se 10kDa ~ 20kDa, ak mas molekilè relatif fòm polimerizasyon li yo se 300kDa ~ 1000kDa oswa plis pase 1000kDa. Dapre diferans ki genyen nan pwa molekilè, yo te kenbe antijèn RV nan vaksen kont laraj imen ak endotoksin ak pwoteyin lame nan vaksen kont laraj imen yo te retire pa manbràn ultrafiltrasyon 300kDa.
Nan eksperyans sa a, kasèt manbràn ultrafiltrasyon ak 3 0 ouvèti 0kDa ak zòn manbràn 0.11m2 yo te itilize kòm ti echantiyon tretman pou konsantre pwodwi entèmedyè vaksen kont laraj imen, ak flux manbràn, efikasite tretman, konsantrasyon miltip, entèsepsyon antijèn, retire endotoksin. , ak retire pwoteyin lame yo te teste.
2Metòd materyèl
2.1 Materyèl eksperimantal
Rabies viris fiks viris CTN-IV souch; Selil Vero; 0.5M idroksid sodyòm; 300kDa ultrafiltration manbràn kasèt (PES materyèl, 0.11m² zòn manbràn).
2.2 Metòd eksperimantal
2.2.1 Preparasyon solisyon rekòlte viris
Selil Vero glase yo te resisite nan dlo tyèd nan 37 degre ~ 39 degre, sispansyon selil yo te sipped soti, ak Lè sa a, ajoute nan 199 mwayen kilti ki gen 10% serom ti towo bèf inaktive. Selil monokouch inifòm yo te kiltive a 37 degre. Souch CTN-IV la te vaksinen ak viris laraj nan yon rapò de 0.1mol/L epi kiltive nan 37 degre. Apre 48h, yo te jete mwayen kilti a epi yo te ajoute 199 mwayen kilti ki gen 0.1% albumin san moun pou kenbe kilti a nan 33 degre ~ 35 degre. Rekòlte venen maladi a yon fwa chak 3d-5d, epi konbine plizyè likid rekòt yo.
2.2.2 Enstale kasèt manbràn la
Enstale kasèt manbràn lan epi konekte fil elektrik la jan yo montre nan figi ki anba a.
2.2.3 Lave dlo
Fèmen tiyo inlet la, tiyo retounen ak nan tiyo, epi mete fen retounen ak nan tiyo fen nan tank likid fatra a. Ranpli tank la ak 1L dlo pou piki.
Louvri tiyo inlet ak retounen, fèmen tiyo a, louvri ponp lan, netwaye liy retounen an ak 10% volim dlo pirifye oswa dlo pou piki, epi kenbe presyon inlet la nan 0.35bar (5psi).
Louvri valv la filtre, fèmen valv la retounen, epi sèvi ak dlo piki ki rete a pou netwaye tiyo filtre a, kenbe TMP nan 0.35bar.
2.2.4 Dezenfeksyon
Fèmen tiyo inlet la, tiyo retounen ak valv transmisyon, epi mete fen retounen ak liy final transmisyon yo nan tank likid fatra a. Ranpli tank la ak 2L solisyon netwayaj.
Louvri tiyo antre ak retounen, fèmen tiyo a, louvri ponp lan, netwaye liy retounen an ak 200mL idroksid sodyòm 0.5M, epi kenbe presyon inlet la nan 0.35bar (5psi) .
Louvri valv la, fèmen valv la retounen, epi netwaye tiyo a ak yon volim 200mL nan solisyon netwayaj, kenbe TMP nan 0.35bar.
Lè sa a, fen retounen ak tiyo a nan fen yo mete nan tank likid la pou netwayaj siklik. Sik netwayaj ak 1 ~ 1.5 fwa to a koule tanjansyèl pwosesis pou 30min.
Drenaj 0.5M idroksid sodyòm epi rense l avèk dlo pou piki dapre 2.2.4 jiskaske net.
2.2.5 Tès flux dlo
Ajoute dlo pirifye nan tank la konsomasyon, mezire ak anrejistre tanperati dlo a nan tank la konsomasyon. Mete fen retounen nan tank la. Kòmanse ponp lan epi ajiste vitès ponp lan epi retounen valv pou reyalize yon diferans presyon transmembrane 0.35bar (5psi). Sèvi ak yon silenn, mezire epi anrejistre to koule a nan fen a nan mL/min. Ajiste vitès ponp lan ak valv retounen pou jwenn 1bar (15psi) presyon diferans transmembran. Sèvi ak yon silenn, mezire ak anrejistre pousantaj koule nan fen-nan mL/min.
Pou estandadize valè koule dlo a, divize valè koule dlo kalkile pa diferans presyon transmembrane a epi miltipliye faktè koreksyon tanperati a nan tablo ki anba la a.
2.2.6 Ultrafiltrasyon konsantrasyon
Lave dlo a soti nan sistèm nan ak tèt tanpon an. Fè sik pou 5min pou ajiste pH ak estabilite iyon sistèm lan. Si tanperati a bezwen ajiste, kontinye sik la jiskaske tanperati sistèm lan estab.
Ajoute likid la manje nan tank la konsomasyon, mete yon pousantaj koule manje (egzanp 400LMH), epi teste to koule a nan diferan valè TMP. Dapre done tès yo, koub yo te trase ak TMP kòm absis la ak Flux kòm ordinate a.
Dirije tiyo jiska fen a nan yon veso ki apwopriye oswa drenaj, tankou tank koleksyon jiska fen, tank likid dechè, ak drenaj pwosesis.
Ekri pwa inisyal la nan likid la manje nan tank la manje, kòmanse ponp lan manje, epi tou dousman sikile likid la manje pou 3min a 4min. Resikilasyon ka ede retire lè rezidyèl nan chemen koule a, kidonk maksimize pèfòmans fim nan.
Louvri valv la atravè tiyo a, tou dousman ogmante vitès ponp lan jiskaske to a pi bon tanjansyèl koule rive, epi ajiste valv la retounen pou reyalize pi bon TMP nan sistèm nan.
Lè sa a, mete tib la nan veso koleksyon an, kòmanse distribisyon lè likid la antre nan veso a, epi anrejistre presyon inlet la ak retounen nan entèval ki apwopriye, epi anrejistre bon jan kalite likid la sou tan nan fen retounen ak nan fen pou kalkile enstantane la. to koule.
Konsantrasyon ultrafiltrasyon echantiyon an fini lè volim likid manje a redwi a volim konsantrasyon sib la.
2.2.7 Dyaliz
Mete tiyo admisyon an, tiyo renouvèlman an ak tiyo retounen nan tank konsomasyon an, mete tiyo transmisyon an nan veso koleksyon an, epi mete veso koleksyon an sou balans lan pou netwaye.
Louvri valv la retounen, kòmanse ponp lan inlet, louvri valv la atravè, ajiste vitès ponp lan ak TMP nan valè ki apwopriye a. Louvri ponp renouvèlman an, kenbe volim likid nan tank la konsomasyon san okenn chanjman, epi kòmanse dyaliz volim egal a. Kòmanse distribisyon lè likid la antre nan veso a, epi anrejistre presyon an nan fen inlet la, fen retounen ak mas likid la nan entèval tan ki apwopriye a, epi jwenn pousantaj koule enstantane pa kalkil.
2.2.8 CIP
Premye rense avèk tanpon, apresa rense l avèk dlo pou piki (operasyon 2.2.3), apresa netwaye ak ajan netwayaj (operasyon 2.2.4), epi finalman rense l avèk dlo pou piki (operasyon 2.2.3).
2.2.9 Tès flux dlo
Operasyon an se jan sa a: 2.4.5.
2.2.10 Konsèvasyon kasèt manbràn
Depo kout tèm (mwens pase oswa egal a 3 jou), kenbe kasèt manbràn nan aparèy la epi sèvi ak solisyon depo a pou sikile pou 10min a 15min, fèmen valv sistèm lan, koupe ekipman pou pouvwa a nan ponp likid la, epi asire ke tank inlet likid la byen sele.
Si tan depo a se 3 jou a 1 mwa, tanpri retire kasèt manbràn nan aparèy la epi sele li nan yon sache plastik oswa yon lòt veso ki byen fèmen. Ajoute apeprè 50mL a 100mL nan solisyon depo a nan yon sache plastik oswa yon veso ki byen fèmen epi sele li. Oswa li ka benyen dirèkteman nan solisyon an depo. Tablo ki anba la a rekòmande kondisyon depo.
3 Rezilta ak analiz
3.1 Envestigasyon faktè enfliyanse efikasite retire pirojèn
Presyon operasyon ultrafiltrasyon: 15 lo tès yo te kouri kontinyèlman. Nan chak pakèt, yo te kenbe presyon filtraj la nan 5, 10, 15 ak 2{{10}}psi pandan ultrafiltrasyon, epi likid rekòlte viris la te konsantre 30 fwa epi li te elimine ak likid tanpon. (10 fwa volim) nan koule kontinyèl. Rezilta yo montre nan tablo ki anba a, to retire endotoxin la te mwens pase 87.0%, to rekiperasyon antijèn te estab nan 86.0%, ak pousantaj retire nan pwoteyin lame te estab nan 90.0%, ki endike ke presyon opere diferan te gen ti enfliyans sou efè rekiperasyon antijèn, retire endotoxin ak retire pwoteyin lame.
Rapò konsantrasyon ultrafiltrasyon: 15 lo tès yo te kouri kontinyèlman. Nan chak pakèt, likid rekòlte viris la te konsantre 30 fwa, 50 fwa, 80 fwa ak 100 fwa respektivman pandan ultrafiltrasyon. Presyon filtraj la te kenbe nan 20psi, epi likid tanpon an (10 fwa volim) te eliye nan koule kontinyèl. Rezilta yo montre nan tablo ki anba la a, to retire endotoxin la te varye ant 53.3% ak 86.9%, to rekiperasyon antijèn te rete estab nan 86.0%, ak to retire pwoteyin lame a. te estab nan 91.0%. Nan echantiyon segmented, pa gen okenn antijèn detekte nan solisyon an transmisyon, ak mwens pase 10% nan pwoteyin lame a rete nan solisyon an viris konsantre. Konsantrasyon an nan endotoxin nan solisyon an konsantre nan viris ogmante ak ogmantasyon nan fwa yo konsantrasyon, ak pousantaj la retire endotoxin te pi wo a nan echantiyon an konsantre nan 80 fwa, ak manifakti a ta ka konsidere tou konsantrasyon nan 100 fwa, ki pa sèlman. amelyore efikasite pwodiksyon an ak redwi pri a, men tou, satisfè egzijans pwodiksyon vaksen an.
3.2 Manbràn kasèt flux rediksyon ak netwayaj rejenerasyon
Apre tretman an, pousantaj rekiperasyon manbràn flux te 92.6%. Pousantaj rekiperasyon an premye nan nouvo kasèt manbràn lan nòmal, dapre pwopriyete obsèvasyon aktyèl la nan likid la manje, prediksyon an ki vin apre nan dezyèm fwa yo ak NTH, pousantaj rekiperasyon kasèt manbràn la pral fèmen nan done yo apre tretman sa a, ak gen tandans pou yo estab. Nan 2h nan yon sèl itilizasyon, rediksyon kasèt manbràn lan te ideyal, epi sèlman 10% nan flux manbràn te apovri anba operasyon an jeneral.
3.2.1 Flux rediksyon nan pwosesis tretman kasèt manbràn
3.2.2 Rezilta netwayaj ak rejenerasyon kasèt manbràn
Konsènan Guidling
Guidling Technology se yon antrepriz nasyonal gwo teknoloji ki konsantre sou biopharmaceutique, kilti selil, pirifikasyon ak konsantrasyon byomedsin, dyagnostik ak likid endistriyèl. Nou te devlope avèk siksè aparèy filtre santrifujeur, ultrafiltrasyon ak kasèt mikrofiltrasyon, filtè viris, sistèm TFF, filtè pwofondè, fib kre, elatriye Ki konplètman satisfè senaryo aplikasyon yo nan biopharmaceutique, kilti selil, ak sou sa. Manbràn nou yo ak filtè manbràn yo lajman itilize nan konsantrasyon, ekstraksyon ak separasyon pre-filtrasyon, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon ak nanofiltrasyon. Liy anpil pwodwi nou yo, ki soti nan ti, filtraj laboratwa yon sèl-itilize nan sistèm filtraj pwodiksyon, tès esterilite, fèmantasyon, kilti selil ak plis ankò, satisfè bezwen yo nan tès ak pwodiksyon. Guidling Technology ap chèche pou pi devan pou kolabore avèk ou!
