Prekosyon pou itilize tib ultrafiltrasyon
(1) Chwazi tib ultrafiltrasyon ki apwopriye a. Anjeneral, pwa molekilè yo dwe kenbe pa ta dwe pi gran pase 1/3 nan pwa molekilè nan pwoteyin sib la. Pou egzanp, si pwa molekilè pwoteyin sib la se 35kDa, yo ka chwazi tib ultrafiltrasyon ak pwa molekilè 10kDa. Si pwa molekilè pwoteyin sib la se apeprè 10kd, yo ka itilize yon tib ultrafiltrasyon ki gen yon pwa molekilè 3KD. Li ak anpil atansyon manyèl enstriksyon an epi peye atansyon sou tolerans nan diferan nan manbràn ultrafiltrasyon nan divès kalite pwodwi chimik yo.
(2) Ultrafiltrasyon ki fèk achte a sèk. Ajoute dlo ultrapure anvan ou itilize, epi dlo a pral konplètman pase nan manbràn la. Pre refwadi li nan yon beny glas oswa frijidè pou kèk minit. Lè sa a, vide dlo a epi ajoute solisyon an pwoteyin. Kantite lajan an ajoute pa dwe depase liy blan an sou tèt tib la. Operasyon an ta dwe limyè. Anvan ou ajoute solisyon pwoteyin, tib ultrafiltrasyon an bezwen mete sou glas pou precooling.
(3) Balans. Tou de mas ak sant gravite yo ta dwe balanse. Remake byen ke vitès la ak akselerasyon pa ta dwe twò vit, otreman manbràn ultrafiltrasyon an pral dirèkteman domaje. Kòmanse santrifij ultrafiltrasyon (santrifij precooling a 4 degre). Apre RPM diferan santrifujeur konvèti nan G, li diferan. Ajiste akselerasyon an nan santrifijeur a nan Kovèti pou ki pi ba a diminye presyon an sou manbràn la. Remake byen ke ou dwe rete tann jiskaske santrifujeur la rive nan vitès sib la anvan ou kite santrifijeur a, otreman lè gen yon pwoblèm ak santrifujeur a, ou pa ka fè fas ak li nan premye fwa. Direksyon manbràn an ak arbr wotasyon an dwe ajiste selon enstriksyon yo (nan ka santrifijeur ang wotasyon, manbràn an pèpandikilè ak arbr a). Nan itilizasyon pratik, vitès la jeneralman pi ba pase sa ki nan manyèl la, sa ki ka pwolonje lavi sèvis tiyo santrifujeur la.
(4) Lè li konsantre sou 1ml ki rete a, pran 50ul solisyon tanpon epi ajoute 10ul pou koule pou wè si li vin ble, konsa pou jije si tib ultrafiltrasyon an koule pwoteyin. Si tib la koule, vide kouch siperyè a epi koule nan nouvo tib la epi kòmanse ultrafiltrasyon. Pou jije avèk presizyon si tib la ap koule, santrifuje ak 5mgml BSA pou 10min, Lè sa a, pran koule nan, kouri lakòl pwoteyin oswa Bradford pou mezi ki graj, epi kontinye ajoute solisyon an pwoteyin ki rete pou konsantrasyon (opere sou glas yo anpeche pwoteyin nan yo te). chofe) jiskaske tout solisyon yo konsantre yo ajoute. Peye atansyon sou si presipitasyon pwoteyin rive pandan santrifujasyon, sa ki lakòz blokaj tiyo. Si presipitasyon rive, detèmine kòz espesifik presipitasyon an, si konsantrasyon nan pwoteyin twò wo oswa tanpon an pa apwopriye; Ansyen an ka rezoud pa similtane ultrafiltrasyon ak plizyè tib ultrafiltrasyon diminye konsantrasyon an. Lèt la se chanje solisyon tanpon diferan jiskaske pwoteyin nan pa presipite.
(5) Yo itilize etap anvan yo pou konsantre pwoteyin. Si ou vle chanje tanpon an, lè solisyon an total pwoteyin konsantre sou apeprè 1ml, ajoute dousman yon nouvo tanpon (ultrafiltrasyon nan 0.22um ultrafiltrasyon manbràn), ak Lè sa a, konsantre sou 1ml pou twa fwa youn apre lòt. Volim final la nan dènye konsantrasyon an depann de konsantrasyon pwoteyin ki nesesè yo, ki jeneralman pa plis pase 500ul, oswa li ka konsantre nan mwens pase 200ul. Dapre konsantrasyon volim nan omwen 10 fwa chak fwa, li ka rive jwenn plis pase 1000 fwa twa fwa, sa ki ka fondamantalman reyalize objektif pou chanje tanpon an.
