Ki jan yo chwazi Tib ultrafiltrasyon ki apwopriye a
Tib iltrafiltrasyon souvan itilize pou konsantrasyon pwoteyin ak ranplasman tanpon yo souvan itilize nan tib iltrafiltrasyon. Gen lòt modèl, ki gen diferan gwosè volim ak tib iltrafiltrasyon, tou depann de pwa molekilè nan pwoteyin sib la, volim nan anvan konsantrasyon ak volim sib la nan konsantrasyon. Reyaksyon.
1. Chwazi yon tib iltrafiltrasyon apwopriye, sitou konsidere MWCO ak volim konsantrasyon. Anjeneral, pwa molekilè a pa ta dwe pi gran pase 1 / 3 nan pwa molekilè nan pwoteyin sib la. Si pwa molekilè nan pwoteyin sib la se sou 10 kd, yon tib ultrafiltrasyon ak yon pwa molekilè konsève nan 3 KD ka itilize.
2. iltrafiltrasyon ki fèk achte a se sèk. Ajoute dlo millik anvan ou itilize. Dlo a pase konplètman nan manbràn lan epi li prekosyon nan yon beny glas oswa frijidè pou kèk minit. Lè sa a, vide dlo a ajoute solisyon an pwoteyin. Kantite solisyon pwoteyin pa dwe depase liy blan an sou tèt tib tès la. Fasil operasyon. Anvan ou ajoute solisyon an pwoteyin, tib la ultrafiltrasyon bezwen yo dwe mete nan glas la pou prefwa.
3. Balans. Mas ak sant gravite dwe ekilibre. Remake byen ke vitès la ak akselerasyon pa ta dwe twò vit, otreman manbrrasyon an ultrafiltrasyon pral dirèkteman domaje. Kòmanse iltrafiltrasyon santrifujeur (prekole santrifij la a 4 degre). Direksyon dyafram nan ak arbr wotasyon an ka ajiste dapre enstriksyon yo (nan ka ang santrifij, dyafram nan pèpandikilè nan arbr a). Nan itilizasyon aktyèl, vitès jeneral la pi ba pase sa ki espesifye nan manyèl la, ki ka pwolonje lavi sa a sèvis nan tiyo santrifujeur la.
4. lè konsantre nan 1ml ki rete a, [pran solisyon an 50ul nan kay la Bradford, ajoute 10ul likid yo wè si li vire ble, epi detèmine si tib la ultrafiltrasyon fwit pwoteyin la. Si tib la koule, vide l 'nan kouch anwo a ak Lè sa a, koule tounen nan nouvo tib la yo kòmanse ultrafiltrasyon. Pou byen detèmine si fwit yo tès tib, tanpri 5mg 10min 10min 10min, Lè sa a, pase li nan, kouri jèl la pwoteyin oswa Bradford] [mezi koarse]. Kontinye ajoute solisyon pwoteyin ki rete a konsantre (opere yon fwa pou anpeche chofaj pwoteyin) jiskaske tout solisyon konsantre yo te ajoute. Pandan santrifugasyon, peye atansyon sou si wi ou non presipitasyon pwoteyin rive ak lakòz blokaj tib. Si presipitasyon rive, tanpri detèmine kòz espesifik presipitasyon, si konsantrasyon pwoteyin la twò wo oswa si tanpon an pa apwopriye; Ansyen an ka rezoud lè l sèvi avèk plizyè tib iltrafiltrasyon an menm tan an diminye konsantrasyon an, pandan y ap lèt la ka chanje diferan tan jiskaske pwoteyin la presipitasyon.
5. Etap anvan yo te itilize yo konsantre pwoteyin. Si tanpon an dwe ranplase, lè solisyon an pwoteyin total konsantre sou 1ml, dousman ajoute yon nouvo tanpon (ultrafiltrasyon nan 0.22um manbràn manbràn), ak Lè sa a, kontinyèlman konsantre sou 1ml pou twa fwa, se konsa ke konsantrasyon final la depann sou konsantrasyon pwoteyin ki nesesè yo, ki se nòmalman pa plis pase 500ul oswa mwens pase 200ul. Dapre konsantrasyon volim nan omwen 10 fwa chak fwa, li se plis pase 1000 fwa ke nan twa fwa, ki ka fondamanè reyalize objektif la nan chanje tanpon an.
6. Retire pwoteyin final la konsantre. Opere yon fwa. Sèvi ak yon tiyo tiyo jòn (200ul), dousman mete pwent an tiyo ansanm ak kwen an, Lè sa a, dousman kònen ak melanje solisyon an pwoteyin. Fè atansyon pou pa manyen manbrrasyon ultrafiltrasyon an. Souse solisyon an konsantre a 200ul chak fwa jiskaske li se konplètman souse. Li pa nesesè yo ekstrè solisyon an dènye konsantre nan pati anba a nan tib tès la, otreman li twò difisil ak manbrrasyon an iltrafiltrasyon ka domaje. Finalman, milliq dlo ajoute nan tib la iltrafiltrasyon san yo pa pase nan manbrrasyon an ultrafiltrasyon pou anpeche pèt dlo ak siye nan len a.
7. Sa ki anba la yo se etap sa yo pou trete tib la ultrafiltrasyon ak reyitilize tib la ultrafiltrasyon.
8. Vide dlo nan tib la iltrafiltrasyon ak double rense ak dlo millik pou plizyè fwa. [si gen presipitasyon pwoteyin evidan nan pati anba a nan tib la tès, ou ka ajoute dlo an premye ak Lè sa a, soufle li lwen ak yon tiyo. Fè atansyon pou pa manyen len a. Sediman an pandye desann ak Lè sa a, kouri ale. Ou pa ka kole li ak dlo tiyo. Apre ajoute 0.2m Solisyon NaOH, mete l 'nan tanperati chanm pou 20 minit, ak balans tib la ultrafiltrasyon pandan peryòd sa a. Santrifij pou yon lòt 10 minit. Vide solisyon ki rete a NaOH ak plonje nwayo a koton nan bèk la (1 oswa 2L) Milliq dlo, mete pou plizyè èdtan, ak Lè sa a, ranplase ak nouvo dlo, mete pou plizyè èdtan kontinyèlman dilye konsantrasyon an nan NaOH. Lave tib 50ml la epi kouvri ak dlo tiyo, epi lave miray enteryè a ak dlo milliq.
9. Pran nwayo a tès plonje, ajoute li nan dlo a plen milik, ak Lè sa a, ranpli tib la 50ml tès ak milliq dlo. Dousman mete nwayo a tib nan 50ml.
Tib santrifij, vide ak divize dlo, Lè sa a, kouvri ak magazen nan 4 degre jiskaske pwochen itilize. Anjeneral pale, dapre etap ki anwo yo ak prekosyon, chak tib pa pral kraze nan twa oswa kat ane.