Teknoloji manbràn ak Klarifikasyon Vaksen (Ⅱ)

Nan atik anvan an, nou te gen kèk entwodiksyon preliminè nan vaksen ak estrateji klarifikasyon vaksen, epi nou pral kontinye eksplore yo nan rès la nan atik sa a. Apre sa ki pi wo a, nou pral kontinye pataje klarifikasyon vaksen yo ak aplikasyon pou tisi manbràn ki gen rapò.

 

2.2.2 Enfliyans pwopriyete fizik ak chimik viris

Apre w fin konsidere sistèm pwodiksyon an ak metòd pou retire kontaminan ki enpòtan yo nan etap klarifikasyon, li enpòtan pou w pran an kont karakteristik viris la epi konsantre sou maksimize pwodiksyon viris la.

 

2.2.2.1 Adsorption viris fasil
Materyèl ki chaje pozitivman ak èd filtre (tankou dyatomit) yo te devlope pou amelyore efè filtraj gwo twou san fon. Malgre ke chaj pozitif la ogmante kaptire asid nikleyik ak HCP, yo konnen diatomit li mare debri selil ak koloid. Sepandan, materyèl sa yo ka kenbe viris la tou atravè mekanis adsorption la. Depi viris la anjeneral chaje negatif nan solisyon, entèraksyon elektwostatik ak filtè a chaje pozitivman ka rive.
Viris yo ka mare tou pa entèraksyon idrofob oswa ki pa espesifik ak sèten materyèl filtre (tankou dyatomit oswa fib vè). Anvlòp viris, akòz anvlòp lipid yo, yo pi fasil pou adsorption sa a. Si viris la adsorbed nan filtè a atravè entèraksyon elektwostatik, epi patikil viris yo detache akòz konpetisyon sèl, rense filtè a ak yon tanpon trè kondiktif ka pasyèlman refè viris la. Sepandan, sa ka tou elimine kontaminan tankou HCP oswa asid nikleyik. Se poutèt sa, yo pi pito itilize yon materyèl filtre altènatif, tankou polypropylène ki pi inaktif.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Li se byen li te ye ke viris grip yo gen tandans fè pèt adsorption pandan klarifikasyon. Se poutèt sa, itilizasyon yon filtè san chaj, filtè ki baze sou polypropylène, apwopriye pou klarifye koleksyon grip la. Thompson et al rapòte itilizasyon yon filtè polypropylène nominal 1.2 μm ki te swiv pa manbràn PVDF 0.45 μm pou klarifye viris grip selil ki baze sou selil MDCK ki pwodui. Yo te fè yon total nèf tès pou pirifye nan echèl 20L, chaje 111 L / m2 pou 1.2 μm filtè polypropylène ak 105 L / m2 pou 0.45 μm PVDF filtre. Rezilta yo te montre ke majorite viris kouri yo byen refè (78-154%). Yo menm tou yo rapòte jiska 58% retire hcDNA, men pa gen okenn retire HCP enpòtan.

 

2.2.2.2 Koupe viris sansib

Gen kèk viris (ankapsile oswa ki pa enkapulasyon) montre rezistans mekanik ki ba epi yo ka detwi pa ekspoze taye pandan santrifujasyon ak etap filtraj manbràn. Fòs taye ki pwodui pandan etap pirifikasyon ki enplike filtraj oswa kwomatografi ka lakòz anvlòp viral la tonbe, kidonk afekte enfeksyon. Tou depan de gwosè, epesè, ak jeyometri kapsid la, kapsid viral la ka frajil oswa, kontrèman, rezistan a presyon ki wo. Gen kèk viris ki anvlòp, tankou viris grip, elastik nan estrès mekanik epi yo ka kenbe tèt ak gwo deformation. Nan lòt men an, fòs taye ka lakòz anvlòp la nan viris mwens rezistan, tankou retroviris, tonbe, kidonk afekte enfeksyon viris la.

VLP anvlòp ki pwodui ekstraselilè yo tou trè vilnerab. Pousantaj taye segondè yo pwodwi nan pwosesis santrifujeur a, sitou nan pati yo inlet ak priz (pousantaj taye segondè yo pwodwi nan koòdone nan gaz-likid). Lè viris la te pirifye pa santrifujasyon gradyan, kapasite transdiksyon kèk retroviris te siyifikativman febli. Lè w ap desine separasyon santrifujeur, yo dwe konsidere enstabilite relatif patikil viral ak fòs taye. Fòs santrifujeur se pa sous la sèlman nan chòk taye, pi enpòtan se konsepsyon an ekipman, espesyalman nan enpòte a ak ekspòtasyon tou gen siyifikatif chòk taye. Diferans nan konsepsyon diferan echèl yo ka mennen nan diferans ki genyen nan pwodiksyon an ak rekiperasyon viris ki sansib pou taye nan diferan echèl.

Yo ta dwe fèt ak anpil atansyon viris taye taye paske gwosè estrès taye ak tan ekspoze a estrès la (akòz resikilasyon) ka wo. Pou viris taye-sansib, aparèy sikwi louvri (fib kre oswa aparèy plak louvri) yo pi pito diminye fòs turbulans ak taye nan kanal la manje.

Chwa paramèt fonksyònman yo ta dwe tou minimize domaj nan patikil viris yo: koule kwa ki ba, presyon mwayen transmembran (TMP), ak tan pwosesis kout.

Kontaminasyon manbràn anba presyon ki wo mennen nan pèt enfeksyon viral, petèt akòz fòs ke aksyon taye ka aji sou anvlòp viral la. Separasyon ki baze sou manbràn ki baze sou gwosè, ak akimilasyon gwo inibitè viral pwa molekilè ak patikil viral ka diminye enfeksyon nan vektè viral.

Degradasyon nan viris taye-sansib pandan filtraj gwo twou san fon pa anpil dokimante. Pèt viris nan filtraj gwo twou san fon pi souvan atribiye a pyèj, adsorption, oswa tan - ak degradasyon viral depandan tanperati nan pwodwi a. An reyalite, menm si estrès mekanik ka rive nan sistèm NFF, tan an ekspoze pou pwodwi NFF yo taye trè kout konpare ak lòt teknoloji paske nan pas rapid rapid ki gen eksperyans nan pwodwi NFF.

 

2.2.2.3 Segman aks dèz dapre gwosè ouvèti a

Yo ka kenbe viris ki depase 100 nm lè yo retire mikoplasm oswa manbràn klas esteril (0.22 μm ak pi ba). Nan ka sa a, yo ta dwe peye atansyon espesyal nan seleksyon an nan filtè. Pou etap TFF mikrofiltrasyon, 0.45μm oswa 0.65μm manbràn yo pi pito pou bon chanèl pwodwi. Pou filtraj NFF milti-etap, kouch ki pi dans la pi gran pase oswa egal a 0.45μm. Yo ta dwe pran prekosyon lè w ap chwazi yon filtè gwo twou san fon, paske kèk aparèy filtre gwo twou san fon ka gen yon kouch fim, ki ka lakòz pèt pwodwi nan kondwi retansyon. Agregasyon viris afekte pwodiksyon viris yon fason negatif epi amelyore retansyon viris akòz gwosè viris la.

Dapre yon patant pa Andre ak Champluvier, omojènizasyon ka anpeche oswa limite bouche filtè pa diminye gwosè a nan total la, bay yon rannman ki pi wo. Homogenization tou amelyore kapasite filtraj rekòt la, ki te ogmante de 2.4-3 fwa.

Twòp enpurte ka entèfere ak rekiperasyon viris. Enpurte yo gen tandans bouche filtè a, ak porositë manbràn bouche ka lakòz pousantaj pasaj viris redwi. Nan yon patant pa de Vocht ak Veenstra, li mansyone ke klarifikasyon dirèk nan dansite selil segondè Per. Koleksyon ak TFF({{0}}.65 oswa 0.2 μm manbràn) te lakòz rekiperasyon viris san adenoviris. Rekiperasyon an ka reyalize lè yo retire seleksyon presipitasyon ADN selil lame anvan etap TFF 0.65 μm. 70% nan adenoviris.

 

 

2.3 Etid ka: Optimizasyon klarifikasyon vaksen viral

Nan Konferans Entènasyonal 2011 sou Pwosesis Byolojik, Sanofi Pasteur te prezante yon apwòch rasyonèl nan tès depistaj filtè pou devlopman nouvo sekans klarifye pou kandida vaksen viral. Rechèch la gen pou objaktif pou simonte pwoblèm yo fè fas a nan optimize pwosesis kilti selil ak viris. Modifikasyon nan pwosesis en a te lakòz yon pèt sede 20% ak kontaminasyon filtè twò bonè pandan etap klarifikasyon an, sa ki lakòz pa gen okenn echèl-up. Yo nan lòd yo etabli yon etap klarifikasyon solid ak évolutive, yo te mande yon re-devlopman konplè nan sekans filtre a, ak pousantaj rekiperasyon viral ki pi wo pase 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Pousantaj rekiperasyon ester seluloz ak filtè fib vè depann sou evalyasyon filtè a (20% oswa 90%).

Kòm yon dezyèm etap, Sanofi Pasteur evalye plizyè konbinezon (faz 2 oswa faz 3 sekans) nan sèt filtè yo pre-seleksyon nan etid la tès depistaj. Tès klasifikasyon koule konstan te pote soti ak yon ti filtè. Anplis de sa, eksperyans sa a te itilize yon rannman ki pi wo pase etid tès depistaj la. Dapre rezilta rekiperasyon viral ak kapasite filtre, ekip la te chwazi de pi bon konbinezon yo pou plis etid.

- Sekans 1 (Etap 2): 30 μm nominal nominal ki plwaye prefiltre polypropylène, ki te swiv pa yon ester seluloz konpoze ak filtè fib vè (1/0.5 μm porosite)

- Sekans 2 (etap 3): menm prefilter (30 μm nominal nominal filtè polypropylène), ki te swiv pa yon filtè polypropylène multikouch entèmedyè epi finalman yon fim polyether sulfone asimetri.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), jan yo montre nan Figi 1.

Figi 1 Mwayèn rekiperasyon viris nan chak etap filtraj. Etid estabilite yo te evalye pou twa sekans filtraj, nan ki sèlman sekans 1 lè l sèvi avèk yon 30 μm nominal nominal ki plwaye polypropylène ak yon 1.0/0.5 μm seluloz ester ak filtè fib vè te rankontre sib la rekiperasyon mondyal. .

Santrifugasyon te evalye tou kòm etap klarifikasyon prensipal la, ki te swiv pa filtraj final {{0}}.45 μm. Plizyè pè vitès / dire yo te teste. Malgre ke pousantaj la filtraj nan 0.45 μm te ogmante pa de fwa, sede final la te pi ba pase sib la nan 85%. Kòm yon rezilta, santrifujasyon pa te etidye plis.

Finalman, yo te evalye pèfòmans nan sekans filtraj polypropylène ak fib vè sou yon echèl pi gwo (160 L gwosè bioreactor). Se sekans filtre a montre nan Figi 2.

Figi 2 Klarifye konbinezon filtè a ak yon reprezantasyon grafik pwodiksyon etap fisèl la. Tren A se pwosesis tradisyonèl la ak tren B se pwosesis optimize a. Sekans B optimize a ka diminye zòn pre-filtrasyon an pa 3 fwa, anile etap filtraj entèmedyè a, epi redwi zòn filtraj final la pa 10 fwa, konsa ogmante rekiperasyon viris mondyal la pa 3%.

Plizyè pakèt yo te klarifye avèk siksè san yo pa gen okenn siy blokaj filtre, tan pwosesis an liy ak limit pwodiksyon, ak sede viris nan > katrevensenk pousan. Optimizasyon etap klarifikasyon pa te gen okenn efè sou etap en ak atribi bon jan kalite kle nan vaksen an. Se poutèt sa, yo te itilize sekans klarifikasyon chwazi a nan pwosesis pwodiksyon vaksen an (1000 L gwosè bioreactor) ak pèfòmans lan te konfime avèk siksè.

 

03 Klarifikasyon sou vaksen bakteri

3.1 Konsiderasyon pou klarifikasyon vaksen bakteri

Dapre Medical Thesaurus (2015), yon vaksen bakteri defini kòm yon sispansyon nan bakteri dilye oswa touye oswa dérivés antijenik yo ki itilize pou pwovoke yon repons iminitè pou anpeche oswa trete maladi bakteri. Plis jeneralman, vaksen bakteri yo ka divize an kat sous-kategori ki baze sou kalite antijèn aktif la. Ajan sa a kapab:

- Touye oswa febli tout bakteri vivan yo. Konnen tou kòm vaksen BCG.

- Pirifikasyon detèminan antijenik (vaksen sou-inite). Vaksen anthrax oswa vaksen koklich aselilè.

- Toksin bakteri (toksin). Toxoid difteri ak tetanòs.

[ Plasmid (pDNA).

Akòz eterojenite lajè nan pwodwi fanmi an, defi pwosesis en ak en lajman depann sou kalite vaksen yo te pwodwi. Se poutèt sa, apre etap fèmantasyon inisyal la ka pirifye oswa pa pirifye, se konsa ke etap la klarifikasyon ka te pote soti.

 

3.2 Estrateji klarifikasyon vaksen bakteri

3.2.1 Toksoid

De toxoid ki pi komen yo pwodui pou itilize vaksen yo se difteri ak tetanòs, ki pwodui pa Corynebacterium diphtheriae ak Clostridium tetani, respektivman. Pwodiksyon tou de vaksen yo sijè a kondisyon regilasyon strik. Rapò teknik OMS la ak anèks li yo fè rekòmandasyon klè pou asire bon jan kalite, sekirite ak efikasite vaksen tetanòs ak difteri. Bon Pratik Faktori Jeneral yo aplike nan pwodiksyon tou de vaksen yo, epi anplwaye yo dwe byen fòme epi yo dwe resevwa vaksen rapèl kont tou de maladi yo.

GMP entèdi mande pou pite ak bon jan kalite pwodwi final la dwe demontre. Dapre OMS ak EP, efikasite yon vaksen final tetanòs dwe detèmine pa konparezon an vivo oswa ak nenpòt lòt metòd pwouve ak yon sibstans referans apwopriye kalibre nan inite entènasyonal yo dapre Creole Entènasyonal pou toxoid tetanòs. Mizajou kondisyon pou efikasite yo te pibliye an 2011 epi yo ka varye selon metòd evalyasyon an. Sekirite (san toksin ak toksisite restorative) nan chak pakèt vaksen yo dwe demontre tou. Finalman, yo dwe adrese estabilite vaksen yo, sitou an tan reyèl.

 

3.2.2 Vaksen ADN Plasmid

Vaksen ADN Plasmid yo itilize pou rezon sante bèt, ak plizyè vaksen ADN plasmid pou itilizasyon imen yo nan plizyè etap nan devlopman ak evalyasyon klinik. Apre fèmantasyon E. coli, bakteri yo kolekte epi fann pou libere ADN plasmid.

Anjeneral, retire debri selil yo fèt pa santrifujasyon oswa filtraj. Sijè a te pale anpil nan dènye piblikasyon yo. Nan piblikasyon sa a, aktyèl en, en, ak fòmilasyon pDNA pwosesis ak defi.

Otè yo bay tou insight sou twou vid ki genyen nan chak etap nan pwosesis fabrikasyon pDNA tipik la ak inovasyon potansyèl nan lavni ak / oswa twou vid ki genyen nan teknoloji aktyèl ki ta ka mennen nan optimize pwosesis plis.

Vaksen ADN Plasmid yo prepare an de etap. Premyèman, selil bakteri yo retire nan mwayen kilti a, epi dezyèmman, debri selil yo apre yo fin retire liz selil la. Tou depan de echèl la, selil yo kolekte lè l sèvi avèk santrifujasyon oswa mikrofiltrasyon TFF. Santrifij la disk-pil yo jete tanzantan nan gwo vitès, ak sede a nan plasmid supercoiled se pòv akòz domaj taye pandan egzeyat. Si yo dwe itilize santrifijasyon, yon santrifujeur bòl solid pi bon. Louvri kanal, aparèy TFF plat ak 0.1 oswa 0.2 μm manbràn mikrofiltrasyon oswa aparèy fib kre ka travay byen.

Paske aparèy fib kre gen yon gwo kapasite chaj solid, yo pafwa bay priyorite. Tipikman, pwosesis sa yo opere nan 3-5 fwa konsantrasyon an, ki te swiv pa 3-5 volim transfiltrasyon. Yo nan lòd yo diminye taye taye ak pi bon kontwòl polarizasyon manbràn, operasyon kontwòl pénétration yo trè rekòmande. Malgre ke santrifijeur yo gen plis pri-efikas nan gwo echèl operasyon komèsyal yo, pi piti pwosesis echèl yo gen tandans sèvi ak filtraj paske nan portabilite ak fasilite nan operasyon.

Flokulan yo te itilize pou fasilite pwosesis, men li ka mennen nan pèt pwodwi. Gen kèk tou rekòmande pou itilize patikil latè dyatom inert, ki te swiv pa filtraj sak.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) filtè manbràn yo bon pou retire debri selil yo. Akòz bouche fò nan debri selil yo, se pito koule ki ba oswa filtraj presyon ki ba. Mikrofiltè ki baze sou Tff yo te itilize pou etap sa a ak filtè sak endistriyèl-echèl. Estatik (nan yon veso melanje) ak kontinyèl (lè l sèvi avèk yon mixer estatik nan liy) fann mande pou filtè diferan.

 

3.3 Etid ka: Konparezon efikasite santrifujasyon, metòd NFF ak TFF pou klarifye toksin tetanòs.

Muniandi et al. konpare twa metòd diferan pou klarifye toksin tetanòs ak toksoid ki soti nan likid fèmantasyon, sètadi santrifujasyon, filtraj fon (NFF), ak TFF. Materyèl tès la te pwodwi nan yon fèrmante 400L lè l sèvi avèk yon mwayen Miller (MMM) modifye. Nan etid santrifujasyon an, selil yo te separe ak kè a nan 4000 RPM nan yon veso 6 × 1L pou 60min. Yo te pran echantiyon supernatant pou detekte rekiperasyon toxoid. Filtrasyon gwo twou san fon sèvi ak 0.45μm ak 0.22μm filtè gwo twou san fon ki gen latè dyatom ak seluloz pou klarifye bouyon fèmantasyon an. Pwosesis la te pote soti nan yon tanperati 35 degre ak 12psi.

Yon modil TFF panèl plat ouvè se tèmik kole ak yon manbràn PVDF 0.22μm nan metòd TFF la. Pwosesis klarifikasyon ki baze sou TFF yo te fèt nan yon vitès kwaze 2000 L / h nan 23 degre, ak filtraj la klarifye te konsantre nan yon pousantaj koule kwa nan 1000 L / h nan 25 degre lè l sèvi avèk yon manbràn TFF sandwich 30kD PES. Likid vyann klarifye (apeprè 6L) konsantre 10 fwa nan pwosesis ultrafiltrasyon sa a. Tès toxoid tetanòs yo te fèt sou echantiyon retann konsantre pou evalye rekiperasyon pwodwi.

Filtrasyon gwo twou san fon an te lakòz yon pousantaj rekiperasyon pwodwi apeprè 89%, ak inite TFF ki te lakòz yon to rekiperasyon pwodwi plis pase 97%. Pwosesis mikrofiltrasyon ak ultrafiltrasyon toujou bay pi wo rekiperasyon pwodwi pase pwosesis NFF la. Rezilta sa yo baze sou tès flokulasyon (Lf).

 

04Klarifikasyon nan vaksen polisakarid

4.1 Konsiderasyon klarifikasyon vaksen polisakarid

Pwosesis pwodiksyon tou de vaksen polisakarid dekonekte/gratis ak vaksen polisakarid makonnen kòmanse ak kilti bakteri lame yo nan yon fermenter. Nan fen fèmantasyon, bakteri yo ka trete ak ajan netwayaj tankou DOC (deoxycholate sodyòm), Triton®X-100, oswa lòt reyaktif apwopriye pou detwi bakteri yo epi ankouraje liberasyon polisakarid yo. Akòz gwo kapasite batri a, koleksyon dirèkteman atravè NFF pa posib ekonomikman paske debi ka ba anpil. Se poutèt sa, chwa ideyal la se sèvi ak yon santrifujeur pou separe boul selil yo. Ranje mikrofiltrasyon TFF ka itilize tou. Selil-gratis sant/penetrant ki gen polisakarid enterè a plis klarifye pa yon NFF gwo twou san fon filtraj sistèm, ki te swiv pa biobattered filtraj, ak Lè sa a, te kontinye nan tretman en pou pirifye plis.

 

4.2 Estrateji klarifikasyon vaksen polisakarid

4.2.1 Premye Pwosedi Klarifikasyon

Santrifugasyon se youn nan teknik ki pi komen pou separe selil ak likid fèmantasyon. Tou depan de echèl la, yo ka chwazi santrifujasyon kontinyèl oswa santrifujasyon pakèt. Li enpòtan sonje ke bon optimize nan kondisyon santrifujasyon ak operasyon yo esansyèl pou pirifikasyon en siksè. Lè w ap chwazi yon manbràn TFF espesifik ak yon gwosè pò, li enpòtan pou w sonje pwa molekilè polisakarid yo, ki souvan gwo ak estriktirèl konplèks, ak pwa molekilè ki sòti apeprè 500kDa. a plis pase 1000kDa. Akòz gwosè a gwo pò louvri, itilize nan 0.22μm, 0.45μm, 0.65μm MF manbràn ka asire rekiperasyon an siksè nan molekil PS nan solisyon an osmotik.

 

4.2.2 Pwosedi Klasifikasyon Segondè

Klè / twoub nan solisyon an fèmantasyon san selil ki rive nan etap klarifikasyon segondè depann de bakteri espesifik, kalite klivaj, kalite serom endividyèl, ak teknik yo itilize pou etap klarifikasyon prensipal la. Turbidity nan sant la ka varye ant 50 ak 150 NTU. Yo ka itilize yon filtè pwofon dansite fraksyon ki chaje pozitivman ki fèt ak dyatomit enpreye ak fib seluloz plen pou klarifye epi redwi turbidite li a <5NTU.

Debi volim filtè gwo twou san fon sa a ka varye ant apeprè 150 L/m3 jiska 250 L/m3. Tipikman, solisyon an pwodwi klarifye filtre nan yon klas rediksyon ki vin apre 0.45 μm biosupported oswa 0.22 μm manbràn klas esterilize pou retire nenpòt patikil selil ki rete, koloid, ak mikwo-òganis potansyèl yo.

 

4.3 Ka etid: Klarifikasyon nan sant la nan bouyon fèmantasyon Streptococcus pneumoniae apre santrifujasyon

Selil yo te separe lè yo ajoute {{0}}.1% (v/v) kalite 8 Streptococcus pneumoniae bouyon fèmantasyon (20 L) pa santrifujasyon kontinyèl. Se sant koleksyon an filtre atravè de filtè separe ki chaje pozitif ak diatomeous latè ki gen fib seluloz. Lè sa a, filtraj filtre endividyèl yo te filtre atravè yon manbràn rediksyon bioloaded PVDF 0.45μm. Tout tès filtraj yo te fèt nan mòd koule konstan ak ponp peristaltik. Tès filtraj lè l sèvi avèk yon filtè ki chaje ak gwo twou san fon ak bouyon fèmantasyon Streptococcus pneumoniae serotip 8 te lakòz twoub tonbe soti nan apeprè 120 NTU a 3 NTU. Tès yo te fèt nan yon vitès koule 140,150 L/m2 /hr ak yon diferans presyon pwen final 20-25 psi, ak yon debi volim apeprè 180-200 L/m2.

Tès filtraj menm jan yo te fèt sou bouyon fèmantasyon Streptococcus pneumoniae serotip 19A. Likid 19A santrifuje a klarifye atravè yon filtè ki chaje ak gwo twou san fon, ki diminye turbidite a soti nan apeprè 40 NTU a 3 NTU. Tès yo te fèt nan yon to koule konstan apeprè 140-160 L/m2 /hr, epi yo te reyalize yon debi volim nan 200-230L/m2 nan yon presyon pwen final apeprè 15 psid. Analiz HLPC nan echantiyon pwodwi yo kolekte pandan tès evalyasyon filtraj yo pa montre okenn pèt sede enpòtan pou filtraj gwo twou san fon oswa 0.45 μm (oswa 0.22 μm) manbràn.

 

05 Konklizyon

Devlopman pwosesis klarifikasyon mande pou entegrasyon plizyè pwosesis inite tankou santrifujasyon, TFF-MF, filtraj gwo twou san fon ak filtraj aseptik. Optimize pwosesis klarifikasyon an mande pou yon konpreyansyon sou fason diferan operasyon inite yo afekte youn lòt. Defi a se chwazi teknoloji ak zouti (ekipman ak enstalasyon) pou satisfè kondisyon yo de pli zan pli konplèks nan likid pwosesis ki pwodui pa bioreactors ki pi efikas jodi a. Ogmantasyon nan pwodiktivite en (titre viral, dansite selilè, elatriye), debri selilè, ak pwodwi liz selil ogmante difikilte pou pwosesis klarifikasyon ak konfonn chwa pou separasyon ak ekipman filtraj.

Konsepsyon ekipman, fasilite pou itilize ak pwòpte ta dwe konsidere lè w ap chwazi echèl pwosesis la. Sa a pral asire konvèsyon efikas ak sekirite operatè lè w ap fè fas ak filtè abandone yo. Yo nan lòd yo devlope pwosesis la klarifikasyon, entegrasyon fò nan etap yo klarifikasyon enpòtan asire ke pwosesis la nan rekòt la en se pri-efikas. Yon seri inite filtraj disponib fasilman pou fasilite tès laboratwa, pwodiksyon pilòt, ak pwosesis gwosè konplè. Lè yo mete ann aplikasyon yon plan travay ki byen fèt e ki evalye plizyè opsyon klarifikasyon, yon moun ka chwazi ak gwosè filtè klarifikasyon yo avèk konfyans pou pwoteje operasyon inite en yo pandan y ap diminye depans fonksyònman yo.

Klasifikasyon vaksen an prezante plizyè defi. Tipikman, pwosesis filtraj la dwe adapte ak sistèm pwodiksyon an, ajan inaktivasyon oswa liz, ak prezantasyon antijèn, pa nesesèman vaksen. Pwosesis vaksen tradisyonèl yo anjeneral itilize santrifujasyon pou okòmansman klarifye vaksen an. Vaksen modèn ak platfòm teknoloji miltip ak pi piti volim pwosesis fè vaksen yo pi apwopriye pou klarifikasyon pa teknoloji ki baze sou manbràn. Vaksen ki fèk devlope lè l sèvi avèk liy selil modèn ak sistèm ekspresyon ak lè l sèvi avèk kondisyon kilti selil ki pi defini fè anpil pwosesis vaksen pi fezab pou filtraj.

 

Sepandan, eterojenite nan eleman antijenik la oswa "antijèn sib" nan pwodwi vaksen yo ogmante konpleksite nan klarifikasyon filtraj. Antijèn yo varye nan gwosè, chimi sifas, ak chaj. Karakteristik sa yo afekte rannman ak rekiperasyon antijèn yo. Vaksen yo prezante defi inik pou klarifikasyon, sitou akòz gwosè makromolekil yo. Sa a, ansanm ak pwoblèm kapasite alantou klarifikasyon, ogmante bezwen an pou konsèy sou estrateji devlopman pwosesis.

Gwosè ak echèl yon operasyon echèl komèsyal pou pwodiksyon vaksen gen yon enpak enpòtan sou chwa teknoloji klarifikasyon. Lè yo lokalize en nan pwosesis la, bon jan optimize klarifikasyon se kritik nan siksè nan operasyon en inite w la, maksimize sede a, rekiperasyon ak solidite nan pwosesis la. Pandan ke santrifijasyon rete yon opsyon teknik solid pou klarifikasyon prensipal, inite mikwofiltrasyon chanèl ouvè (TFF) pou klarifikasyon prensipal ak filtè byen fon oswa filtè manbràn pou klarifikasyon segondè yo pran akseptasyon nan endistri vaksen an. Chanjman sa a kondwi pa bezwen pou pwosesis pi rapid, devlopman pwosesis rapid, pwosesis pòtab, ak aplikasyon pou yon sèl-itilize. NFF ofri yon pwosesis ekonomik ki apwopriye pou opsyon pou yon sèl itilizasyon ti ak gwo. Akòz chanje bezwen regilasyon, disponiblite aparèy pre-aseptik iradyasyon gamma oswa modil ki fèt pou otoklav ankouraje pi vit adaptasyon nan teknoloji ki baze sou NFF oswa TFF.

Anpil pwosesis vaksen klasik enplike evolisyon nan operasyon inite klarifikasyon, lajman akòz kontrent regilasyon ak gwo depans ki asosye nan revalidasyon ak resoumèt oswa esè klinik. Pwosesis platfòm la lè l sèvi avèk konplo a klarifikasyon filtraj ki baze sou te lajman itilize nan plizyè ajan byolojik ak yon wo degre de siksè. Egzanp yo ak ka ki dekri nan dokiman sa a montre ke manifakti vaksen yo gen potansyèl pou yo reyalize nivo sa a nan estabilite, viabilite ekonomik, ak sèvis piblik yon sèl lè yo swiv apwòch modèl la.

Lòt avantaj ki genyen nan filtraj sou santrifujasyon yo se viris taye sansib oswa viris ki gen tandans akimile nan koòdone lè a. Kòm manifaktirè aparèy pote nouvo pwodwi sou mache, manifaktirè vaksen yo ap kontinye pi byen ekipe pou pwosesis klarifikasyon an.

 

Kòm konpayi an premye nan kous la lokalizasyon, Guidling Technology te akimile ase eksperyans enpòtan nan klarifikasyon vaksen an. Guidling Technology se yon konpayi devlopman ak pwodiksyon ki konsantre sou kilti biopharmaceutique ak selil, pirifikasyon ak separasyon. Pwodwi yo lajman itilize nan byomedsin, dyagnostik, filtraj likid endistriyèl, deteksyon, klarifikasyon, pirifikasyon ak pwosesis konsantrasyon; Guidling te devlope avèk siksè tib santrifij ultrafiltrasyon, kasèt manbràn ultrafiltrasyon / mikrofiltrasyon, filtre retire viris, aparèy filtre tanjansyèl koule, pil manbràn gwo twou san fon, elatriye, ki konplètman satisfè senaryo aplikasyon yo nan biopharmaceutique ak kilti selil.

Manbràn nou yo ak filtè manbràn yo lajman itilize nan konsantrasyon, ekstraksyon ak separasyon pre-filtrasyon, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon ak nanofiltrasyon. Pakèt liy pwodwi nou yo, ki soti nan ti filtraj laboratwa yon sèl-itilize nan sistèm filtraj pwodiksyon-kalite, tès esterilite, fèmantasyon, kilti selil ak plis ankò, ka satisfè bezwen yo nan tès ak pwodiksyon.