Teknoloji inaktivasyon ak retire viris nan pwodwi san yo
Pwodwi san yo se "konpozan pwoteyin plasma oswa konpozan selil san, tankou albumin san imen, imunoglobulin imen, faktè koagulasyon imen (natirèl oswa recombinant) konsantre globil wouj, elatriye, separe ak plasma imen an sante oswa espesyalman iminitè plasma imen, pirifye oswa fèt pa teknoloji ADN recombinant, pou dyagnostik, terapi oswa iminopwofilaksi pasif". Pwodwi san yo jwe yon wòl enpòtan nan ijans medikal, sekou aksidan lagè ak prevansyon ak tretman kèk maladi espesifik.
Fond regilasyon
Pratik asirans sekirite yo bezwen asire ke medikaman final la an sekirite pou regilatè yo epi, finalman, pou pasyan yo ak piblik la. Nan ane 1990 yo, Konferans Kowòdinasyon Entènasyonal (ICH 1998) te pibliye "Q5A: Evalyasyon Sekirite Viral nan pwodwi biotechnologique nan liy selil orijin imen oswa bèt" (Q5A: Evalyasyon Sekirite Viral), etabli yon estanda atravè lemond pou sekirite viral.
ICH Q5A dekri yon konplo milti-nivo pou teste ak netwaye validation pou reyalize objektif sa a. Pwogram tès la konsantre sou bank selilè, matyè premyè ak rekòlte bioreactor, konplete pa analiz risk pwodwi yo. Anplis tès yo, ICH Q5A mande pou yo evalye dekontaminasyon an aval kòm yon mezi san danje lè pa detekte kontaminan an amont. Verifikasyon clearance asire ke si nenpòt viris evade rejim tès la, li ka retire ak/oswa inaktive anvan li fini nan pwodwi dwòg final la.
Jan nou koumanse pwogram sekirite viris la
Nan manifakti bioteknoloji modèn (oswa bioprocessing), anjeneral gen twa oswa kat operasyon inite nan tout sekans pirifye a, ki kapab retire oswa inaktive viris la. Sa a gen ladan sèten etap kwomatografik (tankou pwoteyin A oswa echanj aniyon), kilti ki ba pH oswa detèjan, ak filtè retansyon viris. Se pa tout etap sa yo ki pral efektivman retire oswa inaktive tout viris yo.
Pou egzanp, kilti pH ba anjeneral inefikas pou inaktivasyon viris ki pa anvlòp, men li travay byen pou inaktivasyon viris anvlòp. Anba sèten kondisyon fonksyònman, kolòn echanj aniyon an ka pa kapab mare epi retire viris izoelektrik net nan kouran pwodwi a, men li efikas kont viris asid.
Li se yon konbinezon de twa a kat operasyon inite endepandan ak orthogonal ki ansanm asire sekirite viris la nan pwodwi biotechnologie.
Anjeneral, yo sipoze ke yon etap pwosesis solid, efikas, ak serye pral kapab retire oswa inaktive yon gwo kantite viris (tipikman defini kòm 4 log10 oswa plis, kote valè rediksyon log oswa LRV kalkile kòm log10 total la. kantite viris nan opinyon an divize pa kantite total viris nan pwodiksyon an). Sepandan, LRV a pa ka itilize kòm yon sèl mezi absoli nan efikasite yon etap. Done yo ka preliminè. Li fasil pou modèl, relativman ensansib a chanjman nan kondisyon pwosesis, epi li efikas kont yon seri viris (WHO 2004).
Se filtraj viral lajman rekonèt kòm yon etap pwosesis pwisan ak efikas epi li se yon eleman kle nan estrateji an jeneral pou misyon pou minimize risk pou patikil viral ekzojèn ak andojèn pandan fabrikasyon pwodwi bioteknoloji.
Filtè viral yo souvan travay atravè mekanis retansyon fò, ki baze sou gwosè. Dapre mekanis pwisan aksyon sa a, filtè viral yo gen plis chans pase etap kwomatografik pou bay retansyon viral previzib pou yon seri viris. Sa a se paske filtè a gen mwens chans yo dwe afekte pa diferans ki genyen nan pwopriyete yo fizikochimik nan viris diferan ak entèraksyon viris-rezin reglemante pa kondisyon opere. Se poutèt sa, etap filtraj viral la souvan itilize nan pwosesis pou pirifye pwoteyin recombinant ki byen fèt (EMEA 1996), ki te montre tou yo gen pèfòmans gaya nan endistri pwosesis plasma a.
Sepandan, pwodwi san yo se tankou yon nepe de bò, ki pa sèlman sove dè milye de lavi, men tou gen posiblite pou gaye maladi ak poze yon menas pou sante moun. Dapre estatistik, depi 1977 rive 1984, omwen 30,000 moun k ap resevwa san nan peyi Etazini te resevwa san ki enfekte ak viris SIDA. An 1985, 1,200 sou 3,000 emofilik an Frans te enfekte ak SIDA atravè transfizyon san oswa pwodwi san.
Dapre Òganizasyon Mondyal Lasante, 5% a 10% nan enfeksyon SIDA atravè lemond yo te koze pa transfizyon nan san ki enfekte ak SIDA oswa pwodwi san. Premye ka SIDA nan peyi Lachin te enfekte lè yo itilize pwodwi san enpòte ki enfekte ak viris SIDA. Anplis de sa, transmisyon maladi epatit B ak C akòz transfizyon san ak pwodwi san yo te rapòte tou.
1. Viris prensipal transmèt pa pwodwi san ak karakteristik yo
Gen anpil kalite viris ki transmèt nan san ak pwodwi san yo, jan yo montre nan Tablo 1. Pami yo, VIH, HBV ak HCV te konsène pa sèk medikal domestik ak etranje akòz gwo pousantaj enfeksyon yo ak gwo domaj.
Paske san ak pwodwi san yo gen posiblite pou gaye viris, li te afekte seryezman aplikasyon li nan prevansyon ak tretman maladi. Se poutèt sa, nan pwodiksyon an nan pwodwi san, yo dwe ajoute pwosesis inaktivasyon viris ak retire pou asire sekirite pwodwi san yo.
2. Metòd prensipal inaktivasyon ak retire viris
Yo nan lòd yo asire sekirite nan pwodwi san yo, anplis seleksyon an nan donatè san, vaksinasyon kote sa posib, ak tès strik nan san kolekte ak lòt mezi, inaktivasyon an ak retire tretman viris nan pwodwi san se yon lyen enpòtan asire a. sekirite transfizyon san. Plizyè metòd souvan itilize ak efikas pou inaktive ak retire viris yo dekri an detay anba a.
I. Metòd inaktivasyon viris
1. Metòd Pasteur
Baz teyorik metòd sa a se ke pousantaj destriksyon nan estrikti viris la pi wo pase sa yo ki nan estrikti pwoteyin atravè seleksyon an nan tanperati ak tan aksyon. Prèske 50 ane nan rezilta itilizasyon klinik ak dènye eksperyans bèt yo te konfime ke albumin nan solisyon apre 60 degre, 10 h tretman chofaj, se sa ki, Pasteur dezenfeksyon, pa ka sèlman inaktive HBV, men tou, inaktive HCV ak VIH, fè albumin ki pi serye. pwodwi san nan sekirite viral.
Dènyèman, pwosesis Pasteur a te pwolonje nan pwodiksyon IVIG, FVI, FIX, fibrinogen ak lòt pwodwi. Bridonnccu et al. te ajoute pwosesis inaktivasyon viris sa a nan pwosesis IVIG pwodiksyon etanòl ba-tanperati, se sa ki, metòd Pasteur te aplike anba kondisyon ki pa gen okenn estabilize, sèl ki ba ak asidite, ak tit viris la diminye pa 5 Log. Simmonds et al. teste viris transfizyon-transmèt (TTV) nan preparasyon FVⅢ ak FIX konsantre klinikman itilize nan UK a, epi li te jwenn ke pousantaj deteksyon TTV nan pwodwi san yo pa inaktivasyon viris Pasteur te 50% a 75%, ak to a deteksyon pozitif. nan pwodwi apre inaktivasyon Pasteur te 0.
Pousantaj pozitif TTV a te 27% nan 84 pasyan emofili nan Wayòm Ini a ki te itilize pwodwi faktè koagulasyon ki pa inaktive, pandan y ap sèlman 1 nan 19 pasyan ki te itilize pwodwi faktè koagulasyon ki inaktive viris te pozitif, ak yon to deteksyon pozitif nan 5%. Se poutèt sa, pwosesis inaktivasyon viris la trè efikas nan amelyore sekirite pwodwi san yo.
2. Sòlvan òganik konbine avèk surfactant (metòd S/D)
This method was first established by Horowitz et al., a blood center in New York, the principle is that organic solvents can make lipids fall off the surface of the virus, so that the structure of the virus is destroyed and the infection activity is lost. The common S/D method uses n-butyl triphosphate (TNBP) in combination with different surfactants such as Tine80, Triton X100, and sodium cholate. The effect of S/D method on the inactivation of lipid-coated viruses in blood products has been confirmed. For example, when FI concentrated preparations were treated with 0.3%TNBP and 0.2% sodium cholate at 24℃ for 6 h, the inactivation of HBV and HCV was >4 Log,HIV >4.5 Log, and the inactivation of VSV and Sindbis viruses was >4.5 Log, and the recovery rate of FVIII was >90%. Yon gwo kantite pwodwi san inaktive pa metòd S/D yo te pwouve san danje epi serye atravè aplikasyon klinik alontèm, kidonk yo lajman itilize. Sepandan, metòd sa a pa gen okenn kapasite inaktivasyon kont parvoviris B19, HEV ak lòt viris ki pa lipo-kouvwi.
3. Metòd inactivation chalè sèk
Inaktivasyon chalè sèk vle di ke preparasyon lyofilize a trete pa chofaj ak viris la touye pa chalè sèk. Metòd chalè sèk yo itilize souvan yo se 6 0 degre ~ 80 degre, 10 ~ 72 h metòd chofaj ak 80 degre, 72 h metòd tretman. Osi bonè ke ane 1980 yo, li te itil pou chofe FVIII lyofilize preparasyon konsantre ak konplèks prothrombin nan 60 degre ~ 80 degre pou 10 ~ 72 èdtan. Sepandan, li te pwouve ke metòd sa a pa ka konplètman inaktive HBV, HCV, VIH. Tretman chalè sèk nan 80 degre ak 72 h te pwouve yo dwe efikas nan inaktive HBV, HCV ak VIH. Genyen tou dènye rapò sou preparasyon lyofilize nan faktè koagulasyon trete nan 100 degre. Xu Jinbo et al trete IgG nan 100 degre pou 30 min ak inaktive viris stomatit vesikulèr 8.2 Log. Gen kèk moun ki pral friz seche FVIII nan 68 degre pou 72h, nan eta a sèk ak Lè sa a, chofe nan 100 degre pou 0.5 ~ 1 h. Metòd sa a relativman ekonomik.
4. Metòd fotochimik
This method was first proposed by Matthews et al. The principle is that some photosensitizers have a strong affinity for the surface of the virus and the structure of the viral nucleic acid, and are easily activated under appropriate wavelength of light, thus destroying the structure of the virus in contact with them through photochemical action. The photosensitizers that have been used include: hemacoline derivatives, psoralide derivatives, phenothiazines, phthalocyanines, and cyanine 540, etc. The main feature of this method is that it can be used to inactivate the virus of whole plasma, and the inactivation of the virus of platelet products is the current research focus. Scientists from the Department of Experimental Medicine at the University of California in the United States have screened out a new psoralen derivative S-59 among more than 100 chemical modifications of psoralen. The platelets were irradiated with 150 um S-59 combined with 3 J/cm2 UVA, which could inactivate >6.7 Log of free HIV and >6.6 Log nan selil ki mare ak VIH, ak plakèt yo rete bon apre 7 jou nan prezèvasyon fonksyonèl nan vitro, ki te apwouve pa FDA pou esè klinik.
Pami metòd sa yo, metòd dezenfeksyon Pasteur ak metòd S/D apwouve pa FDA Etazini epi yo lajman itilize nan mond lan. Metòd inaktivasyon chalè sèk se sitou apwopriye pou inaktivasyon viris nan preparasyon lyofilize. Metòd fotochimik gen yon gwo efè inaktivasyon sou lipid-kouvwi viris, e li te itilize nan inaktivasyon viris plasma antye an Ewòp, e li gen gwo kandida pou inaktivasyon viris nan eleman selil san. Sepandan, tout metòd sa yo gen enpèfeksyon pwòp yo, tankou esterilizasyon Pasteur se pa ideyal pou inaktivasyon nan kèk viris ki reziste chalè; Metòd S/D pa t 'kapab efektivman inaktive viris la ki pa lipo-kouvwi. Metòd fotochimik la siyifikativman domaje aktivite kèk pwoteyin plasma. Itilizasyon klinik aktyèl la nan envestigasyon swivi yo montre ke pa gen okenn metòd inaktivasyon viris ki ka garanti ke pwodwi san yo absoliman gratis nan risk pou yo transmèt viris.
I. Pwosesis retire viris
Nan pwodiksyon an nan pwodwi san, yon pwosesis inaktivasyon pa ka inaktive tout viris; Anplis de sa, viris la tèt li se yon pwoteyin eterològ, tankou opinyon ak pwodwi a pral pwodwi reyaksyon negatif; An menm tan an, akòz limit la nan nivo teknik, gen toujou viris ki gen karakteristik yo pa jwenn oswa konprann, kidonk metòd yo inaktivasyon viris ki deja egziste pa ka garanti efè a inaktivasyon nan viris sa yo. Se poutèt sa, inaktivasyon pou kont li pa ka garanti sekirite nan pwodwi a epi yo dwe retire nan pwodwi a. Se konsa, viris retire teknoloji ap resevwa pi plis ak plis atansyon. Yo dekri yon ti tan pi ba pase de (2) pwosesis pou retire viris souvan itilize ak efikas.
1. Teknoloji chromatografik
Teknoloji chromatografik refere a itilizasyon divès konpozan ak afinite faz estasyonè oswa diferans entèraksyon, pou reyalize separasyon divès eleman. Kòm yon teknoloji avanse pou pwodiksyon an nan pwodwi san, chromatografi tèt li gen efè a nan retire viris, espesyalman chromatografi afinite ak chromatografi echanj ion. Pou kwomatografi echanj iyon, elisyon gen avantaj sou pénétration nan retire viris. Tablo 2 montre estatistik done yo sou pousantaj retire HAV pa teknoloji kwomatografik nan pwosesis pwodiksyon albumin pa konpayi CSL nan Ostrali. Jan yo ka wè nan Tablo 2, chromatografi echanj iyon ak filtraj jèl yo pi efikas nan retire HAV, ak yon pousantaj retire total de 10.9 Log.
Nan pwodiksyon FVIII, Baxter Healtheare fè chromatografi imunoafinite lè l sèvi avèk jèl anti-FVIII trete, ki ka retire (4.2±0.1)Log ak (5.3±0.9)Log soti nan ki pa. -lipid kouvwi viris tankou PPV ak HAV, respektivman.
2. Nanofilm filtraj
Pou kèk viris ki gen ti dyamèt sifas, tankou HAV ak parvovirus B19, filtraj nanomembran se metòd pou retire pi efikas. Li pran avantaj de diferans gwosè ant pwoteyin ak viris ak adsorption viris pa manbràn filtre a pou izole viris yo. Yo te fè yon etid laboratwa nan Sanquin Blood Supply Site nan Netherlands sou retire viris lè yo ajoute yon filtraj nanomembran Planova 15N nan yon etap, de etap nan pwosesis pwodiksyon konplèks protrombin. Yo te jwenn ke pousantaj yo retire VIH, HAV ak lòt viris yo te ogmante nan diferan degre apre filtraj nanomembran (gade Tablo 3).
Sepandan, pwoblèm sa yo ka rive lè metòd sa a aplike nan pwodiksyon endistriyèl: Premyèman, akòz gwo viskozite nan pwodwi a ak prezans nan pwoteyin gwo dyamèt, gwosè a pò nan manbràn nan chwazi pa filtè a pa ta dwe twò piti, konsa limite retire viris ti dyamèt tankou HCV; Dezyèmman, estabilite nan kontwòl gwosè pò manbràn nan pwosesis pwodiksyon filtre pral afekte retire viris la. Twazyèmman, lè ouvèti a manbràn ki pi piti pase dyamèt patikil viris la bloke, pousantaj koule pwodwi a ap redwi, ki afekte sede a. Se poutèt sa, seleksyon an nan manbràn ki gen pwopriyete ak gwosè pò yo apwopriye pou bezwen yo nan pwodwi yo trete se yon faktè enpòtan nan si wi ou non filtraj la nanomembran ka retire viris yo.
3. Diskisyon
Anba site la nan asire bon jan kalite a nan sous san, pwosesis la nan inaktivasyon ak retire viris se yon mwayen enpòtan ak nesesè asire sekirite nan pwodwi san yo. Sèvi ak yon sèl pwosesis viris inaktive pa ka absoliman garanti sekirite pwodwi san yo. Sou baz teknoloji inaktivasyon viris la, yo te ajoute teknoloji pou retire viris la tankou chromatografi ak filtraj nanofilm, pousantaj retire viris la te ogmante anpil, epi inaktivasyon ak efè retire viris yo te amelyore anpil. Koulye a, Ewòp te pwopoze klèman ke nan pwosesis pwodiksyon an nan pwodwi san, omwen yon inaktivasyon ak retire viris yo dwe itilize asire sekirite nan pwodwi san yo.
Nan Lachin, pifò manifaktirè pwodwi san yo itilize sèlman yon pwosesis viris inaktive nan pwosesis pwodiksyon an, tankou metòd dezenfeksyon Pasteur, metòd S/D, elatriye, men yo pa sèvi ak pwosesis pou retire viris la, ki afekte seryezman kalite pwodwi san yo. Ak asansyon Lachin nan nan Oganizasyon Komès Mondyal la, pwosesis pwodiksyon an ak estanda kalite pwodwi san domestik yo pral nan liy ak mond lan, otreman, li pa ka garanti pati nan mache domestik ki deja egziste, men tou, pa ka fè konpetisyon ak pwodwi menm jan an nan lòt peyi yo. mache entènasyonal.
Se poutèt sa, manifaktirè pwodwi san Lachin nan dwe amelyore pwosesis pwodiksyon an, ranfòse inaktivasyon an ak retire viris la, konsa tankou konplètman asire bon jan kalite a ak sekirite nan pwodwi a. Se poutèt sa, li pral tandans pou manifaktirè Chinwa pwodwi san yo sèvi ak kwomatografi pou pirifye pwodwi san yo epi retire viris asire sekirite nan pwodwi san yo.
Konsènan Guidling
Guidling Technology se yon antrepriz nasyonal gwo teknoloji ki konsantre sou biopharmaceutique, kilti selil, pirifikasyon ak konsantrasyon byomedsin, dyagnostik ak likid endistriyèl. Nou te devlope avèk siksè aparèy filtre santrifujeur, ultrafiltrasyon ak kasèt mikrofiltrasyon, filtè viris, sistèm TFF, filtè pwofondè, fib kre, elatriye Ki konplètman satisfè senaryo aplikasyon yo nan biopharmaceutique, kilti selil, ak sou sa. Manbràn nou yo ak filtè manbràn yo lajman itilize nan konsantrasyon, ekstraksyon ak separasyon pre-filtrasyon, mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon ak nanofiltrasyon. Liy anpil pwodwi nou yo, ki soti nan ti, filtraj laboratwa yon sèl-itilize nan sistèm filtraj pwodiksyon, tès esterilite, fèmantasyon, kilti selil ak plis ankò, satisfè bezwen yo nan tès ak pwodiksyon. Guidling Technology ap chèche pou pi devan pou kolabore avèk ou!