Vaksen patikil tankou viris ak pwosesis pou pirifye en li yo
Vaksen patikil ki tankou viris (VLP) se yon teknoloji vaksen ki baze sou estrikti viris la men li pa gen materyèl jenetik viral yo. Yo ankouraje yon repons iminitè fò pa miman mòfoloji a ak antèn sifas nan viris natirèl, epi yo bay pi gwo sekirite akòz enkapasite yo nan replike. Vaksen VLP yo se yon altènatif pi bon pou vaksen tradisyonèl yo (ap viv atenu ak inaktif). Vaksen VLP pa ka replike nan kò a, kidonk li apwopriye pou tout moun, ki gen ladan fanm ansent oswa moun ki gen konpwomèt sistèm iminitè yo. Anplis de sa, pwoteyin kapsid (ki gen ladan lòt pwoteyin estriktirèl) soti nan viris ak jnom segmenté, tankou viris grip, viris maladi chwal Afriken yo, ak viris bluetongue, kapab tou itilize yo devlope vaksen VLP san yo pa mangonmen sou pwoblèm recombination jenetik tankou vaksen yo atenu. Dezyèmman, VLP yo kapab imite estrikti a nan viris reyèl, kontrèman ak vaksen inaktif, ki gen pwoteyin estriktirèl yo ka modifye pandan inaktivasyon, sa ki lakòz iminojèn defisyans.
Fig. 1. Mekanis Fòmasyon nan VLPs ak VLP chimik
Karakteristik nan vaksen VLP
1. Estrikti ki sanble ak viris natirèl: VLP yo pwòp tèt ou-reyini pa youn viral oswa plis pwoteyin estriktirèl (tankou pwoteyin kapsid), ak gwosè yo ak fòm yo sanble ak viris reyèl.
2. ki pa enfekte: pa gen jenòm viral la, pa ka replike oswa lakòz maladi.
3. High imunojenikite: ka estrikti granulaire dwe rekonèt pa sistèm iminitè a avèk efikasite epi aktive selil B ak repons selil T. Ka pwovoke antikò netralize ak iminite selilè (egzanp, VIH, vaksen HPV).
4. Segondè sekirite: apwopriye pou moun ki gen ki ba fonksyon iminitè (tankou epatit B VLP vaksen).
Fig. 2. Vaksen VLP ki disponib yo
Sistèm pwodiksyon vaksen VLP
VLP yo ka pwodwi nan yon varyete de sistèm ekspresyon, tribin komen yo enkli:
1. Sistèm ensèk selil-baculovirus:
Avantaj: segondè sede, pri ki ba, apwopriye pou asanble pwoteyin konplèks.
Aplikasyon: vaksen HPV, vaksen Ebola.
2. selil mamifè (egzanp selil HEK293):
Avantaj: modifikasyon pòs-translasyonèl yo pi pre moun ak apwopriye pou anvlòp VLP (tankou vaksen kont grip).
Sistèm ledven yo (egzanp Pichia pastoris):
Avantaj: vit, pri ki ba, ki te itilize nan vaksen epatit B.
4. Sistèm Plant (egzanp klowoplas tabak):
Zanmitay anviwònman an ak évolutive, anba devlopman (egzanp, norovirus VLP vaksen).
Pwosesis pou pirifye en nan vaksen VLP
Divèsite nan sistèm ekspresyon VLPS mennen nan inuniversalite a nan pwosesis pou pirifye en.
Fig. 3 Yon jeneral pwosesis koule en tablo
Rekòt ak klarifikasyon:
Nan tout kalite medyòm kilti, propducing pa kilti selil, gen yon gwo kantite patikil viris, osi byen ke anpil debri tisi selil, pwodwi metabolik ak lòt enpurte, fè kilti mwayen an twoub oswa semi-cloudy, si konsantre medyòm nan kilti dirèkteman, manbràn nan ultrafiltrasyon yo pral bloke, rezilta ki konsantrasyon an pa kapab ranpli ak ulrafil la ap bloke ak konsantrasyon an pa kapab ranpli ak ulrafil la pa ka ranpli ak konsantrasyon an pa kapab ranpli ak ulrafil la ap ranpli. Se poutèt sa, li dwe klarifye premyèman anvan konsantrasyon, yo retire patikil yo gwo nan medyòm nan kilti, se konsa ke li vin tounen yon solisyon translusid oswa transparan, ak konsantrasyon an nan medyòm nan kilti ka fè pwosesis la konsantrasyon nòmal epi asire lavi sa a ki sèvis nan manbràn lan ultrafiltrasyon. Klarifikasyon anvan konsantrasyon nan solisyon kilti se yon lyen teknik kle nan pwosesis la nan konsantrasyon.
Yon pwosesis klarifikasyon efikas mande pou yon konbinezon de kapasite segondè yo retire patikil solid, sede pwodwi segondè, fasil echèl-up, ak pwoteksyon nan inite opere en.
Metòd
Santrifigasyon: santrifigasyon diferans retire gwo patikil yo.
Fon filtraj: Sèvi ak yon filtre multistage (egzanp 1.2μm → 0. 45μm) klarifye supènant la.
Filtrasyon koule tanjansyèl (TFF): apwopriye pou pwodiksyon an mas, konsantre echantiyon yo ak retire ti patikil nan enpurte.
Sepandan, si echèl la kiltivasyon se twò gwo, santrifigasyon pran yon bon bout tan, yo pral yon gwo kantite manbràn gwo twou san fon filtre, se konsa pri a nan consommables ogmante anpil. An menm tan an, dansite a segondè nan kilti selil ap diminye chay la nan manbràn nan filtre gwo twou san fon, sa ki lakòz depans ogmante ak dilution pwodwi twòp.
Gen de kalite konpozan manbràn TFF: kasèt plat ak fib kre. Filtrasyon koule tanjansyèl (TFF) kondwi pa diferans lan presyon transmembrane. Sibstans ki sou ak enpurte ki pi piti pase manbràn pò a pase nan manbràn lan, pandan y ap enpurte tankou selil ki gen pi gwo patikil yo bloke. Gwosè a pò nan manbràn lan itilize pou mikrofiltrasyon se {{0}}. 45/0.22μm. Hollow fib ka travay sou segondè likid kontni solid dirèkteman, tankou segondè dansite medyòm kilti selil, li ka elimine santrifigasyon ak etap pre-filtraj, mwens etap, operasyon senp, manbràn ka itilize repete nan netwaye, diminye envestisman ekipman ak depans fonksyònman, nan liy ak kondisyon ki nan pwodiksyon modilè otomatik.
Konsantrasyon ultrafiltrasyon (TFF):
Sib: Pou diminye kantite lajan an nan tretman kwomatografik, amelyore efikasite nan kwomatografik ak pwoteje kolòn nan kwomatografik.
An jeneral, ultrafiltrasyon (TFF) ka konsantre plis pase 100 fwa nan VLP, ak pousantaj la retire nan heteroprotein ka rive jwenn 99%. Pami yo, Hollow Fibre manbràn filtraj teknoloji gen avantaj ki genyen nan modere ak ba fòs taye lenn, pa fasil a ploge, operasyon fleksib, lavi long, pri ki ba ak anplifikasyon fasil, kidonk li se rekòmande yo chwazi Hollow fib pou konsantre ak pirifye VLP.
Lè yo itilize metòd ultrafiltrasyon pou konsantrasyon ak pirifye, li enpòtan anpil pou chwazi bon gwosè pò manbràn lan, ki detèmine efikasite ak kalite konsantrasyon an dirèkteman. Sou yon bò, li nesesè yo chwazi Ouverture nan manbràn efektivman pèlen molekil yo sib asire sede a, ak sou lòt men an, efè a retire ak vitès pwosesis nan heteroproteins dwe konplètman konsidere kòm. Se poutèt sa, pi bon prensip la se chwazi manbràn lan ak gwosè a pi gwo pò ki ka pèlen molekil la sib, epi eseye chwazi manbràn nan filtre ak inifòm distribisyon gwosè pò.
Prensipal pou pirifye:
1. Metòd presipitasyon
Glycol PE (PEG) presipitasyon: presipitasyon selektif nan VLPs mande pou konsantrasyon PEG optimize ak konsantrasyon sèl nan balans sede ak pite.
2. Kromatografi
Kromatografi vokasyon:
Affinity èparin: Sèvi ak pwopriyete VLPS nan sifas chaj negatif (egzanp, HPV VLP).
Antikò kwomatografi kouti: segondè espesifik men chè.
Kromatografi echanj ion (IEX): chwazi echanj anyon (egzanp, kolòn Q) oswa echanj cation (egzanp, kolòn SP) depann sou karakteristik yo ki chaj sifas VLP, ak optimize pH ak gradyan sèl pou fè pou evite agrégation patikil.
Kromatografi entèraksyon idrofob (HIC): ki baze sou idrofobisite sifas VLPS, apwopriye pou kèk VLP ki pa enkapsule.
Fine pou pirifye:
Kromatografi eksklizyon molekilè (SEC, filtraj jèl):
Retire nan pwoteyin lame rezidyèl, asid nikleyik oswa granula, akonpaye pa ranplasman tanpon. Segondè rezolisyon men flux ki ba, souvan itilize kòm etap final la revizyon.
Kromatografi milti-mòd:
Pou egzanp, Capto Nwayo Seri rezin, konbine avèk echanj ion ak efè molekilè Van, ka retire yon varyete de enpurte nan yon sèl etap.
Viris inactivation/nikleyè asid retire (si sa nesesè):
Tretman NUCLEASE: tankou benzonaz degrade lame ADN/RNA.
UF/DF: Kowòdinasyon sistèm TFF yo retire ti fragman nan asid nikleyik ak anzim.
Konsantrasyon ak preparasyon:
Filtrasyon koule tanjansyèl (TFF):
Konsantre nan vize tit pandan y ap deplase tanpon (tankou PBS oswa tanpon fòmilasyon).
Filtraj esteril:
0. 22μm filtraj manbràn asire esterilite.
Tipik ka
Sa ki anba la yo se pwosesis yo pou pirifye en pou vaksen VLP tipik.
Sou Guidling
Teknoloji Guidling se yon antrepriz pwodiksyon-oryante ak gwo teknoloji ki konsantre sou klarifikasyon an en, separasyon ak pou pirifye nan biopharmaceuticals. Pwodwi yo lajman itilize nan pwosesis filtraj MAB, vaksen, dyagnostik, pwodwi san, serom, endotoksin ak lòt pwodwi byolojik; Teknoloji Guidling gen "kasèt filtre ak tanjansyèl aparèy filtraj koule", "manbràn fib fib", "viris filtre", "gwo twou san fon manbràn", "esterilizasyon filtre", "santrifujeur aparèy filtre" ak lòt pwodwi, e li gen yon gwo kantite liy pwodwi, ki soti nan ti laboratwa filtraj pwodiksyon nan pwodiksyon sistèm filtrasyon, satisfè bezwen yo nan tès. Teknoloji Guidling se kap pou pi devan pou kolabore avèk ou!
